第17章：探索循环RNAs作为生物标志物——动脉粥样硬化检测与监测的新兴工具
书籍元数据
- 书名：Transcriptomics in Atherosclerosis
- 编辑：Yvan Devaux
- 出版社：Elsevier
- 出版年份：2026年
- 章节标题：Exploring circulating RNAs: Emerging biomarkers for atherosclerosis detection and monitoring
- 章节作者：Jelena Munjas、 Tamara Ratković、 David de Gonzalo-Calvo、 Miron Sopić、 Yvan Devaux
- DOI：https://doi.org/10.1016/B978-0-443-33064-3.00011-6
第一节 章节概述
本章系统性地探讨了循环RNAs（circulating RNAs，exRNAs）作为动脉粥样硬化性心血管疾病（atherosclerotic cardiovascular disease，ASCVD）生物标志物的潜力与面临的挑战。循环RNAs是指释放到细胞外空间的各种RNA物种，包括微囊泡、外泌体、凋亡小体以及与蛋白质结合的RNAs（如与Ago2、核磷酸蛋白1或高密度脂蛋白结合的RNAs）。这些RNAs广泛存在于血液、尿液和唾液等体液中，其中血液分析在临床诊断中具有重要价值。
本章首先深入讨论了临床前分析（preanalytical）阶段的各种挑战，包括样本类型选择（全血、血浆、血清、血细胞）、抗凝剂使用、溶血与脂肪血症的干扰、药物影响、采样时间以及运输存储条件等关键因素。这些因素在生物标志物定量中贡献了约60%至70%的变异性，是影响研究结果可靠性的首要环节。
在RNA提取方面，本章详细比较了液-液萃取法和固相萃取法两大主流技术路径，并讨论了不同方法对短链RNA（如miRNA）和长链RNA（如mRNA、lncRNA）的回收效率差异。关于检测与定量，本章涵盖了qPCR引物设计中的锁核酸（LNA）修饰、归一化策略的复杂性以及数字PCR（dPCR）这一新兴定量技术。RNA测序部分的讨论则聚焦于针对不同RNA物种（mRNA、lncRNA、circRNA、miRNA）的特异性富集策略、PCR扩增偏倚以及唯一分子标识符（UMI）的应用。
最后，本章综述了多种循环非编码RNAs作为心血管疾病诊断和预后生物标志物的最新研究进展，涵盖miRNA、lncRNA和circRNA在动脉粥样硬化、急性心肌梗死及心力衰竭中的临床应用证据，并展望了这些生物标志物在房颤识别和抗血小板治疗监测中的潜在附加价值。本章在全书中起到了连接基础分子生物学技术与临床生物标志物开发的关键桥梁作用，为后续章节的深入研究奠定了方法学基础。
第二节 关键问题与研究动机
2.1 核心科学问题
本章围绕以下五个核心科学问题展开：
第一，如何确保循环RNA生物标志物分析的高度准确性与可重复性？循环RNAs在血液中的含量极低，且以多种复杂形式存在（囊泡内、蛋白质结合等），样本前处理过程中的每一个环节都可能导致结果显著偏倚。
第二，不同样本类型（全血、血浆、血清、外周血单个核细胞）究竟如何影响循环RNA的组成与定量结果？血浆与血清之间的差异尤为突出——凝血过程中血小板释放的大量细胞外囊泡会显著改变RNA谱。
第三，在标准化方法缺失的现状下，研究者应如何选择最优的RNA提取方法？液-液萃取法与柱式萃取法各有利弊，且对短链和长链RNA的回收效率存在根本性差异。
第四，何种归一化策略能够最准确地反映目标分子的真实表达水平？外源性合成寡核苷酸、内源性参考miRNA以及全局均值三种主流方法各有支持证据，但彼此之间常给出相互矛盾的结果。
第五，循环RNAs在动脉粥样硬化性心血管疾病中究竟能提供怎样的临床诊断与预后判断价值？与传统心肌标志物（如肌钙蛋白）相比，循环非编码RNAs是否能提供增量信息仍是未解之谜。
2.2 前人工作的不足
既往研究报道的不同血液样本中各类RNA物种的比例差异巨大，从一个研究到另一个研究之间存在显著分歧。这一现象的根本原因在于样本前处理方案、提取技术、数据归一化方法、文库制备方案以及生物信息学分析流程之间存在极端异质性。更为关键的是，目前尚无针对循环RNAs的标准化分析方法共识，这严重阻碍了研究结果的可比性和临床转化进程。
2.3 更广泛的意义
心血管疾病是全球首要死因，而动脉粥样硬化作为其核心病理过程，早期往往无明显症状，待临床症状出现时疾病已进展至较晚期阶段。传统生物标志物（如肌钙蛋白）在急性冠脉综合征的诊断中发挥着核心作用，但对于疾病早期筛查和风险分层的能力仍然有限。循环RNAs作为一类新型生物标志物，具有无创采集、实时监测疾病进程的潜在优势，同时也承载着实现精准医学愿景的重要期望。本章的深入讨论对于推动这一领域从基础研究向临床应用的转化具有重要的指导意义。
第三节 主要公式与推导
3.1 循环RNA的稳定性机制
循环RNAs之所以能在充满RNase的细胞外环境中保持稳定，得益于以下几种保护机制：
RNA被包装于微囊泡、外泌体和凋亡小体中，与磷脂双层膜结构紧密结合，免受RNase降解。此外，循环RNAs还可与多种蛋白质形成复合物，包括Ago2（AGO2蛋白）、核磷酸蛋白1（NPM1）以及高密度脂蛋白（HDL）。这些结合蛋白在物理层面隔绝了RNase与RNA分子的接触，是维持RNA稳定性的关键因素。
3.2 数字PCR绝对定量原理
数字PCR（dPCR）的核心在于将样本分割至数百乃至数百万个独立反应腔室中，每个腔室要么包含目标序列（阳性），要么不包含（阴性）。通过统计阳性腔室与阴性腔室的数量，利用泊松分布校正后，可直接计算出原始样本中目标分子的绝对拷贝数。
给定阳性腔室比例为\(p\)，总腔室数为\(N\)，则目标分子的平均拷贝数\(\lambda\)可通过以下公式计算：
其中，\(p = \frac{n_{positive}}{N}\)。这一推导基于泊松分布的基本性质——当每个腔室中目标分子数为零的概率为\(e^{-\lambda/N}\)时，阳性率\(p = 1 - e^{-\lambda/N}\)，反解即得上式。
数字PCR相比实时定量PCR（qPCR）具有以下理论优势：无需标准曲线即可实现绝对定量；不受PCR扩增效率波动影响；具有更高的精确度和灵敏度。在已发表的研究中，dPCR的变异系数较qPCR降低了37%至86%，且在临床血清样本的miRNA检测中表现出更优的诊断性能。
3.3 外泌体离心方案
根据国际血栓与止血学会（ISTH）指南，血小板贫乏血浆（PPP）的制备采用双离心法：
- 第一步：2500×g离心15分钟
- 第二步：2500×g离心15分钟（重复）
欧洲标准化委员会（CEN）方案则推荐：
- 第一步：1600至2500×g离心10分钟
- 第二步：14000至16000×g离心10分钟
后者通过高转速离心可进一步减少细胞来源的核酸污染，但存在同时去除携带exRNAs的细胞外囊泡（EVs）的风险。
3.4 miRNA归一化的几何平均法
当采用全局均值策略对多个miRNA进行归一化时，使用所有分析miRNA的Cq（quantification cycle）值的几何平均值作为归一化因子。设第\(i\)个miRNA的Cq值为\(Cq_i\)（\(i = 1, 2, \ldots, n\)），则几何平均值为：
该方法相比单基因归一化，能显著减少RT-qPCR中样本间和批次间的动力学变异。
第四节 关键算法与建模方法
4.1 循环RNA提取的两大技术路线
液-液萃取法（LLE）
液-液萃取法的核心试剂为TRIzol，其主要成分为胍异硫氰酸酯（GITC）和酚。GITC作为离液剂，能破坏氢键、使蛋白质变性，并将细胞外RNAs从复合物中释放出来。具体步骤如下：首先用TRIzol充分裂解样本，随后加入氯仿进行分液离心。此时系统分为三层：上层水相含RNA，中间相含DNA，下层有机相含蛋白质。在酸性条件下，RNA由于暴露的亲水性核碱基而优先分配至水相。后续通过乙醇洗涤和醇类沉淀即可获得纯化的RNA。
该方法的一个显著优势在于通过反复提取中间相和有机相，可以进一步提升RNA回收率。
固相萃取法（柱式法）
固相萃取法使用含玻璃纤维膜、衍生化硅胶或离子交换膜的微离心柱。首先用含胍盐的裂解缓冲液处理样本，释放结合态RNAs；再加入沉淀缓冲液去除抑制剂；随后在上清液中加入异丙醇或乙醇（96%至100%），为所有RNA分子创造与膜结合的条件；在外加真空或离心力作用下，溶液通过膜，RNA被截留于膜上，而杂质则被洗脱去除；最后用RNase-free水将RNA从膜上洗脱下来。
目前最常用的方案是将TRIzol预处理与柱式萃取相结合的混合方法，可在一定程度上兼顾两种方法的优势。
方法选择策略
研究表明：柱式法对短链RNA（如miRNA）的回收效率总体优于液-液萃取法；联合方法（混合法）在小样本量（低于200μL）条件下表现最佳；液-液萃取法容易丢失低GC含量或极小的RNA分子。对于环状RNA（circRNA）的研究，还需要在标准提取后额外进行核糖体RNA depletion和RNase R消化处理，以降解线性RNA从而富集circRNA。
4.2 miRNA检测的引物设计策略
由于miRNA分子极小（通常约22个核苷酸）且序列间相似性高，常规PCR引物设计策略并不适用。目前主流的解决方案包括：
第一种策略为加尾法——在逆转录过程中通过Poly(A)聚合酶在miRNA 3'端添加poly(A)尾，随后用Oligo(dT)引物进行逆转录，将miRNA扩展为足够长的cDNA模板。
第二种策略为茎环引物法——使用一个含有特定茎环结构的逆转录引物，该引物的3'端含有与miRNA 3'端互补的序列（约12至18个核苷酸），能够特异性地识别目标miRNA并进行逆转录。
为进一步提高检测特异性，在引物中掺入锁核酸（Locked Nucleic Acid，LNA）修饰。LNA是一种核苷酸类似物，其核糖环被锁定在特定的C3'-内酰胺构象中，从而大幅提高引物与目标序列的杂交熔解温度（\(T_m\)）和特异性。LNA修饰的引物甚至可以区分仅相差一个核苷酸的两种miRNA，在不需预扩增的情况下实现高灵敏度检测。
4.3 RNA测序中的富集策略
针对不同目标RNA物种，需要采用不同的富集策略，构成了一个明确的决策树：
对于全血样本，由于红细胞大量表达血红蛋白转录本，必须首先进行珠蛋白（globin） depletion，以避免这些高丰度转录本掩盖低丰度RNAs（如lncRNA、circRNA、miRNA）的信号。
对于mRNA的分析，poly(A)富集是常用方法；而对于lncRNA和circRNA，则需要使用rRNA depletion方法，因为这些非编码RNAs缺乏poly(A)尾结构。
对于circRNA的特异性富集，需使用RNase R处理——RNase R是一种3'至5'核糖核酸外切酶，它能高效降解线性RNA，但无法切割circRNA的闭环结构中的磷酸二酯键，从而实现选择性富集。
对于miRNA的测序文库构建，需要进行专门的3'和5'接头连接（使用T4 RNA连接酶Rnl2和Rnl1）、PCR扩增以及大小分选（通常选择18至30核苷酸范围内的片段）以去除接头二聚体等杂质。
4.4 唯一分子标识符（UMI）
在PCR扩增步骤中，由于不同cDNA分子的扩增效率不同，PCR重复（duplicates）会导致定量偏差。UMI是在起始反应中加入的一小段4至10个核苷酸的随机序列标签，用于标记来自原始分子的每一条序列。在后续生物信息学分析中，具有相同序列但不同UMI的reads被视为来自不同分子，而具有相同序列和相同UMI的reads则被视为PCR重复，可在分析中被识别和去除。
然而，关于UMI在miRNA测序中的实际效用，目前研究结论尚不一致。Wong等人的比较研究表明，QIAseq试剂盒中UMI的使用并未显著提升性能；Androvic等人则报告UMI的使用甚至可能引入额外的定量误差。
第五节 主要结论
5.1 样本前处理的核心要点
全血、血浆和血清各有优劣：全血保留最完整的RNA谱，但对细胞来源的判断困难；血浆是目前循环exRNA研究中最常用的样本基质；血清因凝血过程会引入额外的细胞RNA释放，不宜与血浆直接比较。抗凝剂的选择至关重要——EDTA和柠檬酸盐在4小时内处理时表现最佳，而肝素应避免使用，因其对RT-qPCR有强烈抑制作用。循环exRNAQC研究的结果表明，非保存管在稳定性和重现性方面总体优于保存管，柠檬酸盐管在4小时内处理时性能最优。
5.2 RNA提取方法的共识
没有一种提取方法在所有情况下都是最优的。柱式法对小分子RNA的回收效率更高；联合方法在小样本量条件下优势明显。对于circRNA研究，必须包含RNase R消化步骤以去除线性RNA污染。样本输入量也是关键变量——对于柱式试剂盒，150μL的输入量往往比更大体积表现更好。
5.3 归一化策略的困境
不同归一化策略（外源性寡核苷酸、全局均值、最稳定内源性miRNA）可导致截然不同甚至完全相反的研究结论。直到这一方法学问题得到解决之前，exRNAs作为临床生物标志物的广泛应用将持续受到限制。这一结论凸显了该领域标准化工作的紧迫性。
5.4 dPCR的显著优势
数字PCR凭借其绝对定量能力和更高的精确度，有望克服传统qPCR在低丰度exRNA检测中的局限性。特别值得关注的是，Sequeira等人提出的免提取chip-based dPCR方案——通过直接裂解血浆样本后进行dPCR检测，可在无需RNA提取的情况下实现高准确度的低拷贝数miRNA定量。这一创新方法若被广泛验证，将有望大幅简化临床检测流程并减少批次间变异。
5.5 生物标志物研究的丰富证据
多种循环非编码RNAs已被报道具有动脉粥样硬化诊断价值：miR-130a、miR-27b和miR-210在闭塞性动脉硬化患者血清中升高；lncRNA CoroMarker表现出优异的CAD诊断性能；多种circRNA（如hsa-circ-0124644、circMCTP、circSMARCA5等）亦被证实可作为CAD生物标志物。联合使用多个非编码RNA的面板（panel）策略相比单一分子能提供更高的诊断效能。
对于急性心肌梗死（AMI）的诊断，心肌富集miRNAs（如miR-499、miR-208b）的循环水平与肌酸激酶和肌钙蛋白T峰值浓度显著相关，具有指示梗死面积的潜力。lncRNA MIAT的诊断效能与高敏感性肌钙蛋白T（hs-cTnT）相当；lncRNAs ZFAS1和CDR1AS被识别为AMI的独立预测因子。多种circRNA（TMEM165、UBAC2、ZNF609、ANKRD12、SLC8A1）在AMI后血浆中升高，五种circRNA联合检测的诊断效能优于任一单一指标。
在预后判断方面，心肌梗死后循环miR-150水平下降是左心室重塑的可靠预测因子；p53应答性miRNAs（miR-192、miR-194、miR-34a）与心衰风险相关；lncRNA LIPCAR能预测左心室重塑风险并与心血管死亡相关；circRNA MICRA对左心室重塑具有预后价值。
第六节 挑战与开放问题
6.1 标准化缺失——最根本的障碍
循环RNAs研究领域面临的最大挑战是缺乏统一的方法学标准。从样本采集（采血管类型、抗凝剂种类、采样时间）到RNA提取（方法选择、试剂盒品牌）再到数据分析（归一化策略、生物信息学流程），每个环节都存在大量可选方案，而不同方案之间的结果往往不可比较。exRNAQC Consortium的横断面研究已经揭示了保存管与非保存管之间、以及不同试剂盒之间的显著性能差异，但尚未形成行业共识指南。
6.2 低丰度与高复杂度
血液中循环RNA的绝对含量极低，且以高度异质的形式存在——不同大小的囊泡、蛋白质-RNA复合物、脂蛋白结合RNA等。这一方面对RNA提取和富集技术提出了极高要求，另一方面也意味着我们检测到的信号可能只是真实生物信号的一小部分。RNA测序所需的建库前扩增步骤会引入额外偏倚，使得最终定量结果与原始分子丰度之间的关系更加复杂。
6.3 归一化策略争议
对于miRNA归一化的最佳方法，学界至今未达成共识。外源性合成寡核苷酸（如cel-miR-39）可以监测提取和逆转录效率，但不参与样本前处理过程中的生物变异；内源性miRNA理论上更能反映真实生物变异，但需要为每个实验体系单独筛选稳定参照基因，费时费力；全局均值法在参照基因未知时实用性强，但对批次效应和离群值敏感。Faraldi等人的研究直接证明，同一批数据采用不同归一化策略可导致完全相反的生物学结论。
6.4 miRNA同源序列与异构体的区分
miRNA家族成员之间、以及成熟miRNA与miRNA异构体（isomiRs）之间的序列高度相似，某些情况下仅相差一个核苷酸。使用LNA修饰引物虽然大幅提升了检测的特异性，但在面对海量临床样本时，如何确保长期一致性和可重复性仍是挑战。对于circRNA的检测，背接点（back-splice site）的特异性引物设计同样需要高度优化。
6.5 药物干扰的复杂性
ASCVD患者通常同时接受多种药物治疗——抗凝剂（肝素）、抗血小板药物（氯吡格雷、替格瑞洛）、他汀类药物等。这些药物已被证实可调节特定RNA的表达水平或干扰RNA的定量准确性。肝素对RT-qPCR的抑制效应可持续约6小时，提示采血时间点的选择需要严格把控。在真实的临床环境中，想要完全排除药物干扰几乎不可能，这为生物标志物研究的解读增加了难度。
6.6 从关联性到因果性的鸿沟
目前大多数循环RNA生物标志物研究的证据本质上是关联性的——即观察到特定RNA分子的循环水平与疾病状态之间存在统计学相关性。但这种关联并不能证明因果关系。循环RNAs的来源（哪个组织、哪种细胞）、释放机制（主动分泌还是被动泄漏）以及在病理过程中的具体作用，目前在很大程度上仍然不清楚。在缺乏机制理解的情况下，将关联性生物标志物转化为诊断或预后工具的可靠性始终存疑。
6.7 临床转化的最后一公里
即使在受控的科研环境中建立了有价值的生物标志物panel，从实验室研究到临床常规检测之间仍存在巨大鸿沟。检测成本、可及性、检测周转时间、操作人员培训需求以及监管审批等现实因素，均是制约这些生物标志物临床落地的关键障碍。值得注意的是，目前大多数循环miRNA生物标志物在与传统肌钙蛋白的直接比较中并未展现出显著增量价值，这进一步增加了临床转化的难度。
第七节 个人思考与批判性分析
7.1 方法学哲学的反思
本章最为核心的方法论启示在于：循环RNAs研究领域当前的困境并非来自生物学机制认知的不足，而是源于方法学标准化的严重滞后。作者在多个段落中不厌其烦地列举不同样本类型、不同提取方法、不同归一化策略之间的差异及其对结果的深刻影响，这一写作安排本身就传递了一个清晰的信息——没有可靠的方法学基础，再丰富的生物学发现也不过是沙滩上的楼阁。
这一认识对整个生物标志物开发领域都具有警示意义。当研究者在方法选择上各自为政时，产生的"知识"碎片化且难以整合，最终只会延缓整个领域的进步。从这个角度看，本章不仅是一篇技术综述，更是对该领域研究范式的一次深刻反思。
7.2 数学简化中的得失
在dPCR的绝对定量推导中，使用泊松分布模型来描述分子在分区中的分布是一个理论上优美且实际有效的近似。这一简化的核心假设是：每个腔室中目标分子的存在与否服从泊松分布，且各腔室之间相互独立。在实际应用中，当拷贝数较低（阳性率远低于50%）时，这一模型的准确性最高；但当拷贝数升高、阳性腔室比例接近饱和时，需要进行更精细的校正。
同样值得注意的是，在归一化策略的选择上，研究者面临的是一个多目标优化问题——需要在消除技术变异（提取效率、RT效率、批次差异）与保留生物学变异之间取得平衡。没有任何一种单一策略能同时满足所有目标，这本身就是决策科学中的一个经典trade-off。
7.3 对他汀类药物调控RNA表达的思考
作者提到他汀类药物可调节与动脉粥样硬化相关机制中的特定RNAs表达。这一事实具有双重含义：一方面，他汀治疗本身就会改变循环RNAs的水平，若不加以控制，将成为生物标志物研究中的重要混杂因素；另一方面，这也提示循环RNAs有可能作为他汀治疗效果的监测工具——即药物基因组学（pharmacogenomics）的概念在RNA层面的一种延伸。这一方向的深入研究需要前瞻性队列设计和严格的治疗前后对照。
7.4 联合检测panel vs. 单标志物的战略选择
作者在多处强调了联合多种非编码RNA进行panel检测的优势，相比单一标志物能提供更高的诊断准确度。这一思路在逻辑上是合理的——不同RNA可能来自不同的组织来源、反映不同的病理生理过程，联合检测能够实现信息互补。然而，panel策略也面临着额外的挑战：更多的检测指标意味着更高的成本、更复杂的数据整合模型（如机器学习分类器）以及更大的临床推广难度。
从实际应用角度出发，一个包含3至5个指标的小型panel（如miR-155-5p、miR-483-5p和miR-451a的组合）相比全转录组筛查更为可行。但关键前提是这少数几个指标必须经过严格的方法学验证，且在不同人群中具有可重复的临床表现。
7.5 对未来研究方向的建议
基于本章的系统性分析，若继续推进循环RNAs的临床转化研究，以下方向值得关注：
第一，应优先推进多中心、前瞻性研究，在统一样本采集和处理方案的前提下验证已报道的候选生物标志物。现有的许多研究结论来自回顾性小样本队列，其泛化能力有待检验。
第二，dPCR技术的标准化和普及是当务之急。由于其绝对定量能力和对低丰度目标的高灵敏度，dPCR有望取代qPCR成为循环RNAs临床检测的主流技术平台。但目前dPCR的成本和操作复杂性仍是限制其广泛应用的因素。
第三，将循环RNAs与传统临床指标（如hs-cTnT、NT-proBNP、冠状动脉CT造影结果）进行系统性整合研究，有助于厘清RNAs究竟能提供多少增量诊断和预后信息。第四，探索循环RNAs的功能性角色——即它们不仅仅是疾病状态的被动反映者，更可能是参与疾病进程的主动调控者——将有助于开发以RNAs为靶点的治疗性干预手段。
7.6 写作风格与方法论贡献
从科学写作的角度，本章的方法论值得肯定。作者并未简单地罗列各类生物标志物的研究报道，而是始终将"方法学质量"作为评价证据可靠性的核心标准。这一写作策略使读者在面对丰富的候选生物标志物名单时，仍能保持对数据质量和可重复性的清醒认知。在生物医学研究日益被"可重复性危机"困扰的当下，这种严谨的态度尤为珍贵。
公式汇总
| 编号 | 名称 | 形式 | 物理意义 | 类型 |
|---|---|---|---|---|
| (17.1) | dPCR泊松校正 | \(\lambda = -N \ln(1 - p)\) | 由阳性腔室比例计算原始分子拷贝数 | (T) |
| (17.2) | Cq几何平均 | \(Cq_{geom} = \left(\prod_{i=1}^{n} Cq_i\right)^{1/n}\) | 多miRNA全局归一化的几何平均因子 | (T) |
| (17.3) | 双离心PPP方案 | \(2500 \times g,\ 15\ \text{min} \times 2\) | 去除血小板和血细胞污染的标准化离心方案 | (E) |
| (17.4) | 高速离心方案 | \(1600\text{-}2500 \times g\)（首步），\(14000\text{-}16000 \times g\)（次步） | 欧洲CEN协议中减少细胞核酸污染的离心参数 | (E) |
| (17.5) | LNA引物Tm提升 | \(T_m(\text{LNA}) > T_m(\text{DNA})\) | 锁核酸修饰使杂交熔解温度升高，增强特异性 | (T) |
注：(T)=理论推导公式，(E)=经验/标准化参数方案
术语表（英→中）
| 英文术语 | 中文翻译 | 定义 |
|---|---|---|
| Extracellular RNAs (exRNAs) | 细胞外RNAs | 释放到细胞外空间的各类RNA物种 |
| Circulating RNAs | 循环RNAs | 存在于血液循环系统中的细胞外RNAs |
| Preanalytical factors | 临床前分析因素 | 样本采集、运输、存储等分析前环节中的关键变量 |
| Platelet-poor plasma (PPP) | 血小板贫乏血浆 | 经双离心处理后基本去除血小板的血浆样本 |
| Liquid-liquid extraction (LLE) | 液-液萃取法 | 使用有机溶剂进行相分离来提取RNA的技术 |
| Solid-phase extraction | 固相萃取法 | 利用膜柱（硅胶膜或玻璃纤维膜）吸附并洗脱RNA的技术 |
| Locked Nucleic Acid (LNA) | 锁核酸 | 一种核苷酸类似物，其核糖环被锁定以提高杂交特异性 |
| Unique Molecular Identifiers (UMIs) | 唯一分子标识符 | 用于标记原始分子以识别PCR重复的短序列标签 |
| Digital PCR (dPCR) | 数字PCR | 通过样本分区实现核酸绝对定量的PCR技术 |
| Globin depletion | 珠蛋白去除 | 去除全血样本中高丰度血红蛋白转录本的预处理步骤 |
| RNase R digestion | RNase R消化 | 使用3'至5'核糖核酸外切酶选择性降解线性RNA的步骤 |
| circRNA | 环状RNA | 由前体mRNA反向剪接产生的闭合环状非编码RNA |
| lncRNA | 长链非编码RNA | 长度超过200个核苷子的非编码RNA分子 |
| miRNA / isomiR | 微RNA / miRNA异构体 | 约22核苷酸的调控性小RNA及其序列变体 |
| Normalization | 归一化 | 消除技术变异以使样本间数据可比较的处理步骤 |
| Atherosclerotic cardiovascular disease (ASCVD) | 动脉粥样硬化性心血管疾病 | 由动脉粥样硬化驱动的各类心血管疾病 |
| Acute myocardial infarction (AMI) | 急性心肌梗死 | 心肌因缺血而发生的急性坏死 |
| Heart failure (HF) | 心力衰竭 | 心脏泵血功能受损导致的临床综合征 |
本笔记基于 Elsevier 2026年出版的《Transcriptomics in Atherosclerosis》第17章编写。